衢州市分子診斷試劑原材料標(biāo)準(zhǔn)
發(fā)布時間：2023-05-26 01:28:40
衢州市分子診斷試劑原材料標(biāo)準(zhǔn)
熱啟動Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過程中，主要有三個階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機率大。這樣在未達到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴增出非特異性產(chǎn)物，而使實驗失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過程中，引物錯配和二聚體的形成機率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開始就在大于70℃下進行。當(dāng)溫度較低時，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時酶又開始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過程，消除引物錯配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。
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分子診斷主要是應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測生物體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達水平的變化而做出診斷的技術(shù)。由于分子診斷可以從基因?qū)哟芜M行檢測，因此檢測靈敏度和準(zhǔn)確性的優(yōu)勢較為明顯，可在感染初期識別病毒或者提早確認(rèn)基因缺陷，從而提供個性化的醫(yī)療診斷服務(wù)，主要應(yīng)用于遺傳病、傳染性疾病、腫瘤等疾病的檢測與診斷。分子診斷主要包括 核酸診斷 和 生物芯片技術(shù) 。
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全球，雖然只有少數(shù)的芯片可用于臨床診斷，但國內(nèi)基因芯片技術(shù)已經(jīng)處于世界領(lǐng) 跑的地位。基因芯片技術(shù)將是熒光定量PCR 檢測技術(shù)具挑戰(zhàn)的潛在對手，主要是：熒光定量PCR 技術(shù)一次只能檢測一個或幾個目標(biāo)基因，而基因芯片技術(shù)可以實現(xiàn)對大量目標(biāo)基因的同時檢測。隨著人類基因組計劃的進展，基因芯片在國內(nèi)外已成為研發(fā)熱點。若基因芯片技術(shù)迅速成熟并大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化，將對熒光定量PCR 檢測產(chǎn)生較大的沖擊。不過，基因芯片的大規(guī)模臨床應(yīng)用還存在尚未克服的技術(shù)缺陷，主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價格昂貴等原因，預(yù)計熒光定量PCR 檢測技術(shù)在今后5 到10 年內(nèi)可保持前鋒。
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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應(yīng)（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng)，擴增出所需目的DNA。包括三個基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補配對（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標(biāo)是用于DNA序列測定、基因表達譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域，出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢。
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動物傳染病的預(yù)防措施:.①加強科:學(xué)的飼養(yǎng)管理，增強機體抗病能力。②加強檢疫。對引種、畜禽集貿(mào)市場、畜禽屠宰場的動物及動物產(chǎn)品進行嚴(yán)格檢疫。嚴(yán)禁染疫動物及動物產(chǎn)品的流通。對檢疫時發(fā)現(xiàn)的染疫動物及動物產(chǎn)品應(yīng)按國家的有關(guān)規(guī)定進行無害化處理。③預(yù)防消毒。開展經(jīng)常性的消毒，可以有效地殺滅外界環(huán)境中的病原體，從而達到預(yù)防傳染病發(fā)生的目的。④預(yù)防接種。通過對動物進行免疫接種疫苗，增強其對某些疫病的特異性抵抗力，是防止動物疫病發(fā)生的一個很重要的有效措施。⑤藥物預(yù)防。在日糧和飲水中加人適量抗生素或驅(qū)蟲藥，以達到預(yù)防疾病發(fā)生的目的。