白城市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀研發(fā)
發(fā)布時(shí)間：2024-04-10 01:14:46
白城市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀研發(fā)
人們生活水平不斷提升,對食品質(zhì)量安 全提出更高的要求,檢疫工作不斷深入與完善,僅依靠感觀檢查已遠(yuǎn)不能滿足當(dāng)今工作的需要,須使病理化驗(yàn)室發(fā)揮的作用.為更好地配合產(chǎn)地檢疫,屠宰檢疫及農(nóng)貿(mào)市場的肉食品檢疫,根據(jù)《動物防疫法》,《食品衛(wèi)生法》,《定點(diǎn)屠宰管理辦法》及相關(guān)法律法規(guī)的精神,結(jié)合實(shí)際工作需要,高度重視動物的防疫工作.而動物疫病的診斷離不開先進(jìn)的技術(shù)和設(shè)備,該文主要圍繞動物疫病診斷化驗(yàn)室操作中常見的問題進(jìn)行分析.
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實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實(shí)時(shí)設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補(bǔ)背景熒光的差異。正常化后可以設(shè)定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
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在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn) 上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號的域值，一般這個(gè)域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真 正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。Ct值的含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。
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常用的動物檢疫方法:常用的動物檢疫方法有臨床檢查、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等方法。臨床檢查方法主要看動物的表現(xiàn)(靜、動、臥、起、立、精神、食欲等)是否正常，體溫、脈搏、呼吸等是否在正常生理指標(biāo)范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)則依照農(nóng)業(yè)部頒布的動物檢疫操作規(guī)程規(guī)定的檢疫方法和判定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。①產(chǎn)地檢疫。是指動物離開飼養(yǎng)產(chǎn)地之前的檢疫。②屠宰檢疫。是指在宰前、宰后及屠宰過程中，對動物及動物產(chǎn)品所實(shí)施的檢疫。包括宰前檢疫②屠宰檢疫。是指在宰前、宰后及屠宰過程中，對動物及動物產(chǎn)品所實(shí)施的檢疫。包括宰前檢疫和宰后檢疫兩個(gè)環(huán)節(jié)。③檢疫證明。是指檢疫機(jī)關(guān)給檢疫合格的動物、動物產(chǎn)品出具的法律書證。現(xiàn)行農(nóng)業(yè)部統(tǒng)一監(jiān)制、發(fā)放和使用的檢疫證明包括《動物檢疫合格證明》、《動物產(chǎn)品檢疫合格證明》、《出縣境動物檢疫合格證明》、《出縣境動物產(chǎn)品檢疫合格證明》和《動物及動物產(chǎn)品運(yùn)載工具消毒證明》5種。
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布魯氏菌病：對種畜以外的牛羊進(jìn)行布魯氏菌病免疫，種畜禁止免疫。各省份根據(jù)評估情況，原則上以縣為單位確定本省份的免疫區(qū)和非免疫區(qū)。免疫區(qū)內(nèi)不實(shí)施免疫的、非免疫區(qū)實(shí)施免疫的，養(yǎng)殖場（戶）應(yīng)逐級報(bào)省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門同意后實(shí)施。各省份根據(jù)評估結(jié)果，自行確定是否對奶畜免疫；確需免疫的，養(yǎng)殖場（戶）應(yīng)逐級報(bào)省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門同意后實(shí)施。免疫區(qū)域劃分和奶畜免疫等標(biāo)準(zhǔn)由省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門確定。
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在動物疫病診斷中，化驗(yàn)室的操作較為關(guān)鍵，對診斷的結(jié)果有直接的影響。但是，在當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室操作中還存在一-些問題，如檢測操作中、檢測報(bào)告中未填寫、不開具《檢測委托書》等這些問題的存在嚴(yán)重影響動物疫病的診斷，不利于動物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要對相關(guān)工作制度進(jìn)行不斷地完善，促使化驗(yàn)室的操作更加規(guī)范化、科學(xué)化;加強(qiáng)對實(shí)驗(yàn)室人員的專業(yè)培訓(xùn)，提高其操作水平。只有這樣才能提高動物疫病檢測的準(zhǔn)確性，為我國的動物疫病防控工作做好鋪墊。