無錫市分子診斷試劑原材料研發(fā)
發(fā)布時間：2024-05-27 01:14:32
無錫市分子診斷試劑原材料研發(fā)
指導(dǎo)思想。按照保供固安 全、振興暢循環(huán)的工作定位，立足維護養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展安 全、公共衛(wèi)生安 全和生物安 全大局，堅持防疫優(yōu)先，扎實開展動物疫病強制免疫，切實筑牢動物防疫屏障?；驹瓌t。堅持人病獸防、關(guān)口前移，預(yù)防為主、應(yīng)免盡免，落實完善免疫效果評價制度，強化疫苗質(zhì)量管理和使用效果跟蹤監(jiān)測，保證“真苗、真打、真有效".目標要求。強制免疫動物疫病的群體免疫密度應(yīng)常年保持在百分之90以上，應(yīng)免畜禽免疫密度應(yīng)達到百分之100，高致病性禽流感、口蹄疫和小反芻獸疫免疫抗體合格率常年保持在百分之70以上。
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在動物疫病診斷標準等技術(shù)規(guī)范中，酶聯(lián)免疫吸附試驗對試驗中加底物的反應(yīng)步驟進行規(guī)定，規(guī)定固定的時間，然后加終止液。但是，在許多酶聯(lián)免疫吸附試驗中，加底物的反應(yīng)步驟需要根據(jù)陰性、陽性對照反應(yīng)情況對反應(yīng)的時間進行調(diào)整。如當陰性與陽性對照的反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)后，實驗人員則可以加終止液。有關(guān)資料規(guī)定的時間可能太長或者太短，這樣會對反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生影響。如果加底物的反應(yīng)時間較長，樣品則有可能呈現(xiàn)陽性，易導(dǎo)致誤診情況的產(chǎn)生。
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應(yīng)溫度時，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導(dǎo)致此酶在模板內(nèi)局部二級結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應(yīng)溫度高達75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當提高，這限制了非特異性擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應(yīng)的特異性。
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分子診斷是當代醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要前沿領(lǐng)域之一，其核心技術(shù)是基因診斷，常規(guī)技術(shù)包括：（1）聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）；（2）DNA測序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術(shù)（FISH）；（4）DNA印跡技術(shù)（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）；（7）基因芯片技術(shù)（gene chip）。
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熱啟動酶是耐高溫的依賴于DNA模板的DNA聚合酶，來源于嗜熱的嗜熱水生菌Thermus aquaticus YT一1，一般應(yīng)用于PCR反應(yīng)。TaqDNA聚合酶是一種M92+依賴酶，反應(yīng)體系中須有Mg2+存在，然而保持適當?shù)腗g2+濃度十分重要，因為Mg2+濃度過高或過低均會影響引物與模板的結(jié)合、模板與PCR產(chǎn)物的解鏈溫度、引物二聚體的形成以及酶的活性與精 確性。