張家口市熱啟動(dòng)Taq酶服務(wù)
發(fā)布時(shí)間：2024-11-09 01:06:54
張家口市熱啟動(dòng)Taq酶服務(wù)
分子診斷儀器主要包括核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀和基因測(cè)序儀等。在技術(shù)相對(duì)容易攻破的中端儀器領(lǐng)域，如核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀國產(chǎn)化已經(jīng)成型，國產(chǎn)產(chǎn)品占據(jù)了主要市場(chǎng)，而 基因測(cè)序儀的國產(chǎn)化進(jìn)程正在發(fā)起突圍，主要表現(xiàn)為三種方式： （1）并購國外的測(cè)序儀公司，在其核心技術(shù)的基礎(chǔ)上推出自主品牌的測(cè)序儀，以華大基因?yàn)榇?。?）利用內(nèi)生科研能力自主研發(fā)，以華因康基因、紫鑫藥業(yè)等公司為代表。（3）與國外知名測(cè)序儀生產(chǎn)企業(yè)合作，在其測(cè)序儀原型的基礎(chǔ)上加以改造，形成具有特殊用途的自主品牌的測(cè)序儀，代表公司是貝瑞和康、達(dá)安基因和博奧生物等。
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動(dòng)物傳染病的預(yù)防措施:.①加強(qiáng)科:學(xué)的飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力。②加強(qiáng)檢疫。對(duì)引種、畜禽集貿(mào)市場(chǎng)、畜禽屠宰場(chǎng)的動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格檢疫。嚴(yán)禁染疫動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的流通。對(duì)檢疫時(shí)發(fā)現(xiàn)的染疫動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品應(yīng)按國家的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行無害化處理。③預(yù)防消毒。開展經(jīng)常性的消毒，可以有效地殺滅外界環(huán)境中的病原體，從而達(dá)到預(yù)防傳染病發(fā)生的目的。④預(yù)防接種。通過對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種疫苗，增強(qiáng)其對(duì)某些疫病的特異性抵抗力，是防止動(dòng)物疫病發(fā)生的一個(gè)很重要的有效措施。⑤藥物預(yù)防。在日糧和飲水中加人適量抗生素或驅(qū)蟲藥，以達(dá)到預(yù)防疾病發(fā)生的目的。
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Taq酶的酶動(dòng)力與擴(kuò)增效率有關(guān)。一般熱啟動(dòng)Taq酶的酶動(dòng)力越強(qiáng)，PCR擴(kuò)增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號(hào)值更高，而且更適合做多重PCR檢測(cè)。我們?cè)容^過多家公司的熱啟動(dòng)Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動(dòng)Taq酶，酶動(dòng)力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時(shí)的熒光信號(hào)值高。在國內(nèi)品牌中，BIOG熱啟動(dòng)Taq酶的指數(shù)期較長，可做3重PCR，且擴(kuò)增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應(yīng)，在做3重反應(yīng)時(shí)，擴(kuò)增曲線低矮，熒光信號(hào)值較低，無典型擴(kuò)增曲線，結(jié)果很難判定。
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熱啟動(dòng)通過抑 制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR 儀達(dá)到變性溫度。延緩加入Taq DNA 聚合酶的手工熱啟動(dòng)方法十分煩瑣，尤其是對(duì)高通量應(yīng)用。其他熱啟動(dòng)方法使用蠟防護(hù)層將一種基本成分(鎂離子、酶、模板、緩沖液等) 隔離開。在熱循環(huán)時(shí)，蠟熔化把各種成分釋放出來并混在一起。蠟防護(hù)層法同樣比較煩瑣，易于污染，不適用于高通量應(yīng)用。
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常規(guī)普通PCR常見問題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長退火延伸時(shí)間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。
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熱啟動(dòng)Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過程中，主要有三個(gè)階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯(cuò)配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機(jī)率大。這樣在未達(dá)到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴(kuò)增出非特異性產(chǎn)物，而使實(shí)驗(yàn)失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過程中，引物錯(cuò)配和二聚體的形成機(jī)率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開始就在大于70℃下進(jìn)行。當(dāng)溫度較低時(shí)，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時(shí)酶又開始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過程，消除引物錯(cuò)配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對(duì)Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。