廈門市實時熒光定量PCR儀標準
發(fā)布時間：2022-08-07 01:37:14
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布魯氏菌病：對種畜以外的牛羊進行布魯氏菌病免疫，種畜禁止免疫。各省份根據(jù)評估情況，原則上以縣為單位確定本省份的免疫區(qū)和非免疫區(qū)。免疫區(qū)內(nèi)不實施免疫的、非免疫區(qū)實施免疫的，養(yǎng)殖場（戶）應(yīng)逐級報省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門同意后實施。各省份根據(jù)評估結(jié)果，自行確定是否對奶畜免疫；確需免疫的，養(yǎng)殖場（戶）應(yīng)逐級報省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門同意后實施。免疫區(qū)域劃分和奶畜免疫等標準由省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門確定。
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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應(yīng)（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng)，擴增出所需目的DNA。包括三個基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補配對（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標是用于DNA序列測定、基因表達譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域，出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢。
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在動物疫病診斷中，化驗室的操作較為關(guān)鍵，對診斷的結(jié)果有直接的影響。但是，在當(dāng)前實驗室操作中還存在一-些問題，如檢測操作中、檢測報告中未填寫、不開具《檢測委托書》等這些問題的存在嚴重影響動物疫病的診斷，不利于動物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要對相關(guān)工作制度進行不斷地完善，促使化驗室的操作更加規(guī)范化、科學(xué)化;加強對實驗室人員的專業(yè)培訓(xùn)，提高其操作水平。只有這樣才能提高動物疫病檢測的準確性，為我國的動物疫病防控工作做好鋪墊。
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熱啟動 Taq 酶的應(yīng)用：PCR 能夠快速特異的擴增任何已知的 DNA 片段，因此被廣泛的應(yīng)用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。Relia 熱啟動酶因具有 5’-3’核酸外切酶活性，可用于熒光定量 PCR 反應(yīng)。采用熱啟動法擴增是提高 PCR 特異性的常用方法，熱啟動酶是很好的選擇。除此之外，因其具有的高特異性高靈敏度被廣泛應(yīng)用到各個方面：構(gòu)建 cDNA 文庫，產(chǎn)生大量 DNA 測序，突變體分的析構(gòu)建，基因分離，遺傳病診斷，法醫(yī)鑒定等。