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衢州市熱啟動(dòng)Taq酶標(biāo)準(zhǔn)

發(fā)布時(shí)間:2022-10-03 01:36:28
衢州市熱啟動(dòng)Taq酶標(biāo)準(zhǔn)

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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性,在適反應(yīng)溫度時(shí),dNTP的摻入速度為35~100 nt/(s.酶分子),擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)7.6 kb。在低溫條件下,Taq DNA聚合酶的活性明顯降低,導(dǎo)致此酶在模板內(nèi)局部二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進(jìn)速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度(95℃以上)時(shí),很少有DNA合成;在體外,DNA在較高溫度時(shí)的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應(yīng)溫度高達(dá)75~80℃,故退火溫度和延伸溫度均可適當(dāng)提高,這限制了非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的出現(xiàn),增加了PCR反應(yīng)的特異性。

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選擇靈敏度高的熱啟動(dòng)Taq酶。一般說,Taq酶的擴(kuò)增效率高,靈敏度就高,但也有不一致的情況。如果要擴(kuò)增的樣本目標(biāo)基因豐度較低,建議對(duì)Taq酶的擴(kuò)增靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。常見的檢測(cè)方法是將目標(biāo)基因質(zhì)粒片段進(jìn)行10倍或5倍梯度稀釋,在較低的幾個(gè)稀釋度進(jìn)行PCR檢測(cè),選擇檢測(cè)靈敏度較高的熱啟動(dòng)Taq酶。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上常用的ABI、Bioline、Biog的擴(kuò)增靈敏度都比較高,但知名品牌T的靈敏度略低,研究者可根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行選擇。

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全球,雖然只有少數(shù)的芯片可用于臨床診斷,但國(guó)內(nèi)基因芯片技術(shù)已經(jīng)處于世界領(lǐng) 跑的地位?;蛐酒夹g(shù)將是熒光定量PCR 檢測(cè)技術(shù)具挑戰(zhàn)的潛在對(duì)手,主要是:熒光定量PCR 技術(shù)一次只能檢測(cè)一個(gè)或幾個(gè)目標(biāo)基因,而基因芯片技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)大量目標(biāo)基因的同時(shí)檢測(cè)。隨著人類基因組計(jì)劃的進(jìn)展,基因芯片在國(guó)內(nèi)外已成為研發(fā)熱點(diǎn)。若基因芯片技術(shù)迅速成熟并大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化,將對(duì)熒光定量PCR 檢測(cè)產(chǎn)生較大的沖擊。不過,基因芯片的大規(guī)模臨床應(yīng)用還存在尚未克服的技術(shù)缺陷,主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價(jià)格昂貴等原因,預(yù)計(jì)熒光定量PCR 檢測(cè)技術(shù)在今后5 到10 年內(nèi)可保持前鋒。

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加強(qiáng)組織領(lǐng)導(dǎo)。地方各級(jí)人民政府對(duì)轄區(qū)內(nèi)動(dòng)物防疫工作負(fù)總責(zé),組織有關(guān)部門按照職責(zé)分工,落實(shí)強(qiáng)制免疫工作任務(wù)。省級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門具體組織實(shí)施強(qiáng)制免疫,各級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)開展養(yǎng)殖環(huán)節(jié)強(qiáng)制免疫效果評(píng)價(jià),各級(jí)承擔(dān)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督職責(zé)的機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)監(jiān)督檢查養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)履行強(qiáng)制免疫義務(wù)情況。落實(shí)主體責(zé)任?!吨腥A人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》規(guī)定,飼養(yǎng)動(dòng)物的單位和個(gè)人是免疫主體,承擔(dān)免疫責(zé)任。有關(guān)單位和個(gè)人應(yīng)自行開展免疫或向第三方服務(wù)主體購(gòu)買免疫服務(wù),對(duì)飼養(yǎng)動(dòng)物實(shí)施免疫接種,并按有關(guān)規(guī)定建立免疫檔案、加施畜禽標(biāo)識(shí),確??勺匪?。

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動(dòng)物為什么要打預(yù)防針:主要是預(yù)防和控制傳染病的發(fā)生。傳染病的發(fā)生具備傳染源、傳染途徑和易感動(dòng)物三個(gè)環(huán)節(jié),缺一不可。在防疫中,切斷任何一個(gè)環(huán)節(jié),傳染即告終止。打預(yù)防針是將有效的生物制品(疫苗、菌苗、類毒素)作為抗源,引入動(dòng)物機(jī)體,或注入免疫血清,以激發(fā)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生特異性抵抗力,使易感動(dòng)物轉(zhuǎn)化為不易感動(dòng)物的一種手段,由于過去通常采用注射法,所以人們習(xí)慣上把免疫接種稱為打預(yù)防針。有組織、有計(jì)劃地進(jìn)行免疫接種,是預(yù)防和控制動(dòng)物傳染病發(fā)生流行的重要措施之一,在某些傳染病如禽流感、口蹄疫、豬瘟等病的防控措施中,免疫接種更具有關(guān)鍵性的作用。所以,打預(yù)防針是為養(yǎng)殖業(yè)保駕護(hù)航,可以避免疫病發(fā)生,減少死亡損失,使養(yǎng)殖業(yè)增收。